¡Hola steemians! me alegra estar de vuelta para compartir con ustedes mi conocimiento en el ámbito biológico e incentivar a esta comunidad al estudio de las ciencias. Después de la revisión de la etiqueta y de las reglas estipuladas por #Stem-espanol y #steemstem realizare mi quinta publicación usando este tag. Como en nuestro conversatorio realizado por el canal de discord el domingo hablamos de los hongos me gustaría ahora tocar otro organismo básico como lo son las bacterias, enfocándome en los agentes químicos que afectan el crecimiento bacteriano, lo que les servira a ustedes con tecnicas basicas de sembrado que antibióticos servirían ante determinadas bacterias y como llevar a cabo la practica en general del estudio de la misma.
En biología, existen dos organismos básicos como son los hongos y las bacterias. Estos organismos forman parte fundamental en nuestras vidas, debido a que, muchos de ellos son necesarios para nosotros y para los demás seres vivos, aunque no todos son buenos. De hecho, en nuestro cuerpo, se calcula que existen más de 100 billones de bacterias y muchas de ellas intervienen en procesos como la asimilación de alimentos, síntesis de vitaminas, entre otros.
Es importante antes de la realización de este experimento saber que el crecimiento bacteriano es consecuencia directa de los procesos vitales que, eventualmente, le permiten a la célula reproducirse. Estos procesos son controlados por enzimas que tienen intervalos de pH y temperatura donde su actividad es óptima. Asimismo, los componentes de la pared celular y la membrana plasmática se ven afectados por temperaturas o valores de pH distintos de su intervalo de estabilidad. Por otra parte, el balance hídrico de la célula también se encuentra en un delicado equilibrio. Dependiendo de los valores de actividad de agua del medio se vería comprometida o no la disponibilidad de agua de la célula. (Madigan y col, 1998; Benson, 2001).
Este conocimiento es de gran importancia a la hora de querer propiciar o inhibir el crecimiento de un microorganismo.
Objetivo
Estudiar la acción de algunos factores químicos que afectan el crecimiento bacteriano: antibióticos, antisépticos y desinfectantes.
Experiencia 1
Materiales:
• Pipeta Esteril
• Discos Antibióticos
• Tubos de cultivo con 1 mL de los siguientes microorganismos: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescen y Enterobacter cloacae
• Espátula de Drigalsky
• 5 placas de agar Mueller-Hinton dividida en 4 cuadrantes con antibióticos (Ver tabla 1)
Tabla1. Placas y cuadrantes con los diferentes tipos de antibióticos.
Método:
El método a utilizar fue el de Kirby-Bauer, en el cual se quería evaluar la acción de algunos tipos de antibióticos, en distintas bacterias (Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescen y Enterobacter cloacae). Se tomó una placa de agar Mueller-Hinton y se inoculo con la pipeta esteril 1 ml del microorganismo, cada placa contenía una sola especie bacteriana (teniendo un total de 5 placas, en la 1 se inoculo Staphylococcus aureus, en la placa 2 Serratia marcescen, en la placa 3 Pseudomonas aeruginosa, en la placa 4 Escherichia coli y en la placa 5 Enterobacter cloacae), se extendía el inoculo con la espátula de Drigalsky y se colocaba un disco antibiótico en cada una de los 4 cuadrantes que se encontraba dividida. Luego se incubaba durante 48 horas y al transcurrir el tiempo se media el diámetro de la zona de inhibición.
Resultados:
Experiencia 2
Materiales:
• Pipeta Esteril
• Tubos de cultivo con 1 mL de los siguientes microorganismos: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescen y Enterobacter cloacae
• Pinza
• 5 placas de agar LB suplementado con 0,2/V de glucosa dividida en 4 cuadrantes
• Soluciones de: etanol 70%, jabón 1:25, yodo 2% y yodo 0.5% (Ver tabla 2)
Tabla2. Placas y cuadrantes con los diferentes tipos de antisépticos y desinfectantes.
Método:
El método a utilizar fue el de la acción de antisépticos y desinfectantes, en el cual se quería evaluar la acción del yodo y el jabón en cada una de las bacterias. Igual que en la experiencia anterior se utilizaron Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescen y Enterobacter cloacae, por lo tanto se trabajó en 5 placas de agar, pero esta vez el tipo de medio era LB suplementado con 0,2/V de glucosa. Se inoculo con una pipeta esteril 1ml del microorganismo (cada placa contenía una sola especie bacteriana, y la inoculación fue idéntica a la de la primera experiencia), se extendía el inoculo con la espátula de Drigalsky y con la ayuda de la pinza se tomaban los discos de papel de filtro estériles, se sumergían individualmente en soluciones de Jabón 1:25; yodo 2% P/V; yodo 0,5% P/V; etanol 70% V/V y se colocaban en cada una de los 4 cuadrantes en las que se encontraba dividida la placa. Luego se incubaba durante 48 horas y al transcurrir el tiempo se media el diámetro de la zona de inhibición.
Resultado:
Experiencia 3:
Materiales:
• Asada de inoculación
• Tubos de cultivo con 1 mL de los siguientes microorganismos: Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa, Serratia marcescen y Enterobacter cloacae
• Pinza
• 10 placas de agar LB suplementado con 0,2/V de glucosa dividida en 6 cuadrantes (Ver Tabla 3)
Tabla 3. Placas y cuadrantes con los diferentes tipos de antisépticos y desinfectantes, identificando ademas el tipo de bacteria a incubar en la experiencia 3.
Método:
El método a utilizar fue evaluar el del tiempo de acción de un desinfectante. Al igual que en la experiencia anterior se utilizaron placas de agar LB suplementadas con 0,2% P/V de glucosa, pero esta vez se dividían en 6 cuadrantes. Se inoculaba 0,1 ml del cultivo a un tubo que contenía 5ml del desinfectante a evaluar, que podían ser soluciones de Jabón 1:25; yodo 2% P/V; yodo 0,5% P/V; etanol 70% V/V o antibacterial. Se agitaba en vortex y se sembraba una asada en el cuadrante (al tiempo 0, a los 2, 5, 10 15 y 30 minutos); Staphylococcus aureus (placa 1 y 2), Serratia marcescen (placa 3 y 4), Pseudomonas aeruginosa (placa 5 y 6), Escherichia coli (placa 7 y 8) y Enterobacter cloacae (placa 9 y 10) recordando aplicar vortex cada vez que se inoculaba la asada. Luego se incubaba durante 48 horas, y al transcurrir el tiempo se contabilizaba el numero de colonias.
Resultados
Conclusiones
• Se pudo aprender técnicas de pruebas de distintos factores químicos sobre bacterias, y saber cuáles tienen efectos bacteriostáticos y cuales bactericidas, evaluando además de forma más específica como actúan distintas bacterias bajo variados tipos de antibióticos, antisépticos y desinfectantes.
Bacteriostático: es aquel que aunque no produce la muerte a una bacteria, impide su reproducción; la bacteria envejece y muere sin dejar descendencia. Un efecto bacteriostático está producido por sustancias bacteriostáticas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como medios defensivos contra las bacterias.
Bactericida: es aquel que produce la muerte a una bacteria. Un efecto bactericida está producido por sustancias bactericidas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como medios defensivos contra las bacterias. antimicrobianos de efecto lísico o lítico (Lisis) en las bacterias, provocan una reducción en la población bacteriana en el huésped o en el uso de sensibilidad microbiana.
• Es importante recordar que existen microorganismos que generan resistencias a múltiples sustancias, generando problemas de salud, y se viene observando a nivel mundial. El uso indiscriminado de los antibióticos y la presión selectiva ambiental realizada por antisépticos y desinfectantes ha generado respuestas de supervivencia en los microorganismos, que los capacita para evadir con eficiencia la acción bactericida de algunos agentes.
• No se determinó como tal si alguna de estas sustancias generaba una resistencia, porque no estaba dentro de nuestros rangos de investigación, pero el objetivo principal que era estudiar la acción de algunos factores químicos que afectan el crecimiento bacteriano fue cumplido satisfactoriamente, y es un buen comienzo para introducirnos en la investigación bacteriana y los agentes que promueven o inhiben su actividad.
Bibliografía Consultada
• Benson, H. 2001. Microbiological Applications: Laboratory Manual in General Microbiology. McGrawHill. XI+478 pp.
• Madigan, M.T., Martinko, J.M. y Parker J. 1998. Brock Biología de los Microorganismos. 8va. ed. Prentice Hall. Madrid. 1096 pp.
• Rodríguez, M. 2013. Guía de prácticas de Laboratorio de Microbiología General BC-3361; de la división de ciencias biológicas y el departamento de biología celular. Universidad Simón Bolívar. Sartenejas-Venezuela.
Paginas Web::
• S.N. (2011) Resumen de “bacteriostático” y “bactericida” (consultado el 14 de septiembre del 2018 a las 5:30pm a través de http://jarytqm.blogspot.com/2011/09/resumen-de-bacteriostatico-y.html)
• S.N. (2014) Diferencia entre hongos y bacterias (consultado el 14 de septiembre del 2018 a las 2:00pm a través de https://diferencias.eu/entre-hongos-y-bacterias/)
NOTA: Para el procedimiento (metodología experimental) se uso como modelo la “Guía de Laboratorio de Microbiología General BC-3361; de la división de ciencias biológicas y el departamento de biología celular” de la USB. Los únicos cambios fueron la utilización de Serratia marcescen y Enterobacter cloacae en lugar de Proteus vulgaris y Bacillus subtilis.
OBSERVACIÓN: Todas las fotos fueron tomadas por mí (@isacastillor) con un Blu Vivo XL luego de realizar cada uno de los experimentos en el Laboratorio de Microbiologia General de la USB, de igual manera la elaboración de cada una de las tablas y recuadros incorporados al texto.
Espero les haya gustado este post y haber contribuido al conocimiento científico dentro de la comunidad #stem-espanol. Seguiré compartiendo contenido de biología pura en los ámbitos de: microbiología, genética, química y bioquímica, tanto básica como avanzada.
¡Felicitaciones!
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Excelente practica, el contenido esta muy bien explicado saludos @isacastillor
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